安瓿管真空冷凍干燥法
將微生物冷凍，在減壓下利用升華作用除去水分，使細胞的生理活動(dòng)趨于停止，從而長(cháng)期維持存活狀態(tài)。
操作步驟如下：
好氧菌冷凍干燥管的制備
1 安瓿管準備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí)，先用2%鹽酸浸泡過(guò)夜，自來(lái)水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時(shí)間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。
2 保護劑的選擇和準備
保護劑種類(lèi)要根據微生物類(lèi)別選擇。配制保護劑時(shí)，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過(guò)濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。
3 凍干樣品的準備
在最適宜的培養條件下將細胞培養至靜止期或成熟期，進(jìn)行純度檢查后（參見(jiàn)科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規程》（試行）），與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜（以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個(gè)活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支）。采用較長(cháng)的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個(gè)球部。若是液體培養的微生物，應離心去除培養基，然后將培養物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短，最好在1-2小時(shí)內分裝完畢并預凍。分裝時(shí)應注意在無(wú)菌條件下操作。
4 預凍
一般預凍2小時(shí)以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。
5 冷凍干燥
采用冷凍干燥機進(jìn)行冷凍干燥。
將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內，開(kāi)始冷凍干燥，時(shí)間一般為8-20小時(shí)。
6 真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
7 保藏
安瓿管應低溫避光保藏。
8 質(zhì)量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項指標檢查，如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。
厭氧菌冷凍干燥管的制備
主要程序與需氧菌操作相同，注意保護劑的選擇和準備，保護劑使用前應在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右，脫氣后放入冷水中急冷，除掉保護劑中的溶解氧。
復蘇方法
—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，
—— 將安瓿管頂部燒熱，
—— 用無(wú)菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端，
—— 用無(wú)菌水或培養液溶解菌塊，使用無(wú)菌吸管移入新鮮培養基上，進(jìn)行適溫培養。
